【研究机构】

1. 包头医学院口腔医学院

2. 呼和浩特市第一医院神经内科

3. 包头医学院第一附属医院口腔科

【研究人员】

刘焱 高翔 赵晓霞 陈青宇 高俊武

【发表时间及刊物】

中国组织工程研究

2020年13期

第2005-2010页

【实验方法】

由健康成人的正常牙周韧带中分离、纯化人牙周膜干细胞并传代培养，对融合达80%的第3代人牙周膜干细胞进行无血清培养基连续培养24h，收集上清液即得到人牙周膜干细胞条件培养液。采取有限稀释克隆法培养来源于慢性牙周炎患者牙周韧带中的人牙周膜干细胞，分别在含50%人牙周膜干细胞条件培养液+50%常规培养液（条件培养液处理组）及常规培养液（对照组）2种条件下培养。免疫荧光染色法检测两组细胞中波形丝蛋白、角蛋白和间充质干细胞标志物STRO-1的表达；MTT比色法结合流式细胞术分析细胞增殖活性；经体外成骨诱导后，碱性磷酸酶试剂盒和RT-PCR检测两组细胞碱性磷酸酶活性和成骨相关基因（Runx2，OPN，OCN）的表达水平。

【结果】

（1）两组细胞均符合成体干细胞的形态特征，呈现长梭形或多角形，倒置相差显微镜下观察其形态无明显差异；

（2）经免疫荧光染色可见两组细胞均呈现波形丝蛋白阳性表达，角蛋白阴性表达，且间充质干细胞标志物STRO-1阳性表达；

（3）MTT结果显示：培养第3，5，7天时，条件培养液处理组的细胞增殖活性均显著高于对照组（P<0.01）；

（4）细胞周期分析显示：与对照组相比，条件培养液处理组细胞处于G2/M期及S期的数量明显增多（P<0.05）；

（5）体外成骨诱导第5，7天时，条件培养液处理组碱性磷酸酶活性高于对照组（P<0.05）；

（6）成骨诱导21d后，成骨相关基因Runx2、OPN、OCN在条件培养液处理组的表达量均显著高于对照组（P<0.01，P<0.05）。

【结论】

健康组织来源的人牙周膜干细胞条件培养液可以促进炎症组织来源人牙周膜干细胞的增殖及成骨分化。