【研究内容】

微生物计数法中计数培养基的适用性检查方法

【发表时间及刊物】

中国药典•三部2015版

通则1105，非无菌产品1105

【实验方法】

微生物计数法系用于能在有氧条件下生长的嗜温细菌和真菌的计数。本法用于检查非无菌制剂及其原、辅料等是否符合相应的微生物限度标准。其中所使用的计数培养基在使用前应进行适用性检查，具体实验方法如下：

一、    菌液制备

试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的干燥菌种为0代），计数培养基适用性检查试验用菌株如下表所示：

按上表规定程序培养各试验菌株，取金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌的新鲜培养物，用0.9%氯化钠溶液制成适宜浓度的菌悬液；取黑曲霉的新鲜培养物用0.9%氯化钠溶液将孢子洗脱并制成适宜浓度的黑曲霉孢子悬液。所制备的菌液室温下在2h内使用，若在2～8℃，24h内使用。

一、    阴性对照

为确认试验条件是否符合要求，应进行阴性对照试验，阴性对照试验应无菌株生长。如阴性对照有菌生长，应进行相应的偏差调查。

二、    培养基适用性检查

按上表规定，接种小于100cfu的菌液至TSA或TSB或SDA中，在上表规定条件下培养。每一种菌株接种2管或2个平皿。同时，用相应对照培养基替代被检培养基进行上述试验。

四、    判断标准

1.  被检固体培养基上的菌落平均数与对照培养基的菌落平均数的比值在0.5～2之间。

2.  被检培养基和对照培养基上的菌落形态一致。

3.  被检液体培养基管与对照培养基管比较，试验菌应生长良好。